Резюме. В статье представлены результаты предпринятого компанией Unilever исследования вирулицидной активности ополаскивателя, содержащего цетилпиридиния хлорида (СРС), входящего в состав ополаскивателя для полости рта «Лесной бальзам», по отношению к возбудителю новой коронавирусной инфекции SARS-CoV-2. Данное исследование проводилось на фоне обширной дискуссии в мировом медицинском сообществе и СМИ о целесообразности использования ополаскивателей для полости рта в качестве дополнительной меры профилактики COVID-19 и сокращения передачи вируса. Полученные результаты подтвердили, что СРС обладает вирулицидной активностью в отношении суррогатного штамма вируса SARS-CoV-2. Рецептура ополаскивателя «Лесной бальзам» с CPC снижает активность вируса SARS-CoV-2 в тестах in-vitro на 99,9% уже через 30 секунд (что считается рекомендуемым временем для полоскания). Это позволяет предположить, что ополаскиватель может использоваться в качестве одной из повседневных гигиенических мер, направленных на снижение риска заражения коронавирусной инфекцией наряду с такими средствами профилактики, как мытье рук, соблюдение социальной дистанции и ношение маски.
Роль полости рта в распространении коронавирусной инфекции
Вторая волна пандемии COVID-19, которая, как и ожидалось, поднялась с началом сезона традиционной заболеваемости острыми респираторными инфекциями осенью 2020 года, продолжает испытывать на прочность мировую систему здравоохранения, продлевая ситуацию, которую ВОЗ признала чрезвычайной. До начала массовой вакцинации против COVID-19 санитарно-гигиенические меры (маски, перчатки, мытье рук, социальное дистанцирование и дезинфекция) остаются важнейшими повседневными мерами профилактики новой коронавирусной инфекции.
Известно, что вызывающий ее вирус SARS-CoV-2 в качестве ключа, открывающего доступ в клетку, использует рецепторы ангиотензин-превращающего фермента-2 (АПФ-2). Вызываемое коронавирусом тяжелое поражение легких объясняется обилием таких рецепторов на поверхности альвеолярного эпителия. Однако рецепторы АПФ-2 есть и в других тканях и органах, в частности в клетках слизистой оболочки полости рта, языка и слюнных желез. Неслучайно именно в слюне инфицированных пациентов число копий коронавируса очень велико, а его распространение с ее капельками и слизью из носа (воздушно-капельным способом при кашле или чихании) считается главным путем передачи COVID-19.
Вирус SARS-CoV-2 может быть обнаружен в слюне до, во время и после острой клинической стадии болезни и даже в бессимптомных случаях. Это доказывает, что его репликация происходит во рту: ткани полости рта, как уже говорилось выше, экспрессируют рецептор AПФ-2, с помощью которого SARS-CoV-2 проникает в эпителиальные клетки слюнных протоков, которые могут становиться первыми мишенями инфекции.
Поскольку полость рта играет важнейшую роль в распространении SARS-CoV-2, способы снижения вирусной нагрузки во рту и/или передачи коронавируса изо рта могут стать важным инструментом, помогающим снизить распространение SARS-CoV-2. В связи с этим во многих источниках литературы высказывалось предположение о том, что хорошая гигиена полости рта способна на определенное время подавлять активность вирусных частиц в полости рта, тем самым снижая риски распространения инфекции.
Химические соединения, активные против оболочечных вирусов
Коронавирусы относятся к разряду оболочечных вирусов с липидной оболочкой, которая может быть разрушена за счет солюбилизации липидов или повреждения гликопротеинов при помощи некоторых антимикробных ингредиентов, используемых в рецептурах для ухода за полостью рта. Это повидон-йод (PVP-I), цетилпиридиния хлорид (CPC), перекись водорода, а также растительные компоненты, которые обладают активностью в отношении оболочечных вирусов. Большим потенциалом в этом смысле обладает СРС – антимикробный компонент широкого спектра действия с подтвержденной эффективностью использования в средствах гигиены полости рта в качестве антиналетного и антикариесного актива, который подходит для регулярного применения.
Хотя в единичных публикациях описаны некоторые коммерческие ополаскиватели для полости рта, обладающие вирулицидным эффектом в отношении SARS-CoV-2 in-vitro, протестированные составы не содержали этанол или CPC. С целью подобного тестирования рекомендовано использование суррогатных вирусов, с которыми можно безопасно работать в доступных боксах биологической безопасности класса 2. В связи с этим Американское общество тестирования и измерений (ASTM) выпустило руководство по суррогатным вирусам SARS-CoV-2, включающее использование штамма коронавируса человека 229E.
Материалы и методы исследования вирулицидной активности СРС
Компания Unilever провела исследование для оценки эффективности ополаскивателей для полости рта, содержащих цетилпиридиния хлорид и этанол, в отношении суррогатного штамма коронавируса SARS-CoV-2, используя стандартный вируцидный суспензионный тест для определения времени, необходимого для уничтожения.
Предметом исследования был ополаскиватель для полости рта, содержащий 0,07% масс. цетилпиридиния хлорида и натуральными экстрактами, а также ополаскиватель, содержащий 15,1% масс. этанола. Контроли, состоящие только из вируса, также были частью тестирования.
Вирулицидную активность ополаскивателей для полости рта, содержащих 0,07% CPC оценивали в соответствии с методом, основанным на протоколе суспендирования согласно международному стандарту ASTM E1052-20 с использованием клеток MRC-5 (фибробласты легких плода человека), зараженных CoV-229E. Аликвоту вируса 0,5 мл добавляли к 4,5 мл чистого ополаскивателя для полости рта, а затем инкубировали при температуре окружающей среды в течение 30 и 60 секунд, после чего оценивали TCID50 (доза заражения 50% культуры ткани) с помощью пробит-анализа (метод Спирмена-Кербера). Среднее снижение log10 рассчитывали как разность TCID50 между тестируемыми продуктами и контролем. Исследование проводилось в лаборатории компании BioScience Laboratories Inc. (США).
Результаты испытаний
Результаты проведенного исследования демонтируют, что при времени контакта 30 и 60 секунд (рекомендуемом для полоскания) ополаскиватель для полости рта, содержащий 0,07% CPC, обеспечивал одинаковое значение TCID50 – среднее снижение вирусной нагрузки 3,08 log10, то есть на >99,90%.
Что касается ополаскивателя для полости рта с содержанием 15,1% этанола, при времени контакта 30 и 60 секунд уменьшение TCID50 составило 0,17 и 0,30 log10 соответственно. Применение ополаскивателя для полости рта с содержанием этанола привело к снижению TCID50 на 22,79% при воздействии в течение 30 секунд и несколько большему снижению TCID50 (на 45,59%) через 60 секунд.
Обсуждение результатов
Проведенное исследование показывает, что ополаскиватель для полости рта, содержащий 0,07% CPC, обладает вирулицидной активностью в стандартном суспензионном тесте для определения «времени, необходимого для уничтожения». Время контакта (30 и 60 секунд) соответствует рекомендованной продолжительности использования ополаскивателя для полости рта и указывает на то, что ополаскиватель для полости рта с содержанием CPC обладает вирулицидной активностью в отношении суррогатного вируса
По сравнению с составом, содержащим CPC, ополаскиватель для полости рта с этанолом не обеспечил значительного вирулицидного эффекта в экспериментальных условиях. Как правило, содержание этанола в ополаскивателях для полости рта составляет 14–27%. При указанной концентрации и длительности полоскания рта этанол вряд ли будет обладать вирулицидным эффектом.
Технология CPC уже широко используется в стоматологической отрасли и известна своими антибактериальными и антивирусными свойствами, позволяющими эффективно решать основные проблемы полости рта. Рецептуры для полоскания полости рта, содержащие CPC, эффективны против образования зубного налета и полезны для поддержания здоровья десен.
Учитывая описанные выше результаты, полученные для ополаскивателя для полости рта, содержащего CPC, дальнейшее исследование четвертичных аммонийных химиотерапевтических средств может быть полезным для более детального исследования вирулицидного действия в отношении SARS-CoV-2. Целесообразно дальнейшее изучение конкретно CPC в исследованиях in-vitro и клинических исследованиях для подтверждения эффективности в отношении вируса
А вот как комментирует результаты данного исследования главный инфекционист Федерального медико-биологического агентства, заведующий кафедрой инфекционных болезней и эпидемиологии РНИМУ им. Пирогова Владимир Владимирович НИКИФОРОВ:
— Идея лежит на поверхности: вирус способен размножаться в слюнных железах, а также в желудочно-кишечном тракте, куда попадает при сглатывании. Поэтому давно пора было проработать и заблокировать этот путь развития инфекции. Маска — это чисто механический фильтр, который не дает больному поделиться порцией вируса со здоровыми. На развитие болезни при заражении она никак не влияет: вирус активно размножается плодится в полости рта. Поэтому необходимо применение какого-то безопасного и эффективного средства, который бы во рту уничтожал вирус.
Продукт компании Unilever содержит CPC — это универсальный ингредиент широкого спектра действия, уничтожающий вирусы и бактерии. Способ логичный для всего мира, где при чистке зубов утром применяют ополаскиватели. Достаточно добавить туда лишь 0,07% цетилпиридиния хлорида, чтобы за 30 секунд инактивировать 99,9% вирусов.
Мнение эксперта
На вопросы о результатах проведенного компанией Unilever исследования ответил главный научный сотрудник Национального исследовательского центра эпидемиологии и микробиологии имени Н.Ф. Гамалеи, доктор медицинских наук Анатолий Давидович АЛЬШТЕЙН.
— Ряд экспертов в СМИ уже высказывали предположения о том, что ополаскиватели для полости рта снижают активность вирусных частиц, и это может уменьшить вероятность передачи коронавируса. Скажите пожалуйста, чем существенно отличаются прошлые предположения от исследований Unilever?
— Исключительно добавлением нового вещества. В растворы для ополаскивания рта в основном вводят компоненты, которые устраняют неприятный запах, смывают налет. А для борьбы с COVID-19 должны включаться вещества, способные инактивировать вирус – с вирулицидным действием. Они не дают терапевтического эффекта, но если прополоскать рот таким составом, концентрация вируса на слизистой уменьшится.
— В исследовании говорится о таком веществе, как цетилпиридиния хлорид. Он один показывает положительные результаты или совместно с другими ингредиентами?
— Сам по себе он тоже способен давать вирулицидный эффект, но наверняка это не единственное такое вещество. Их просто пока не слишком активно изучали. Что касается цетилпиридиния хлорида, то он малотоксичный и разрушает липидные оболочки. Ту самую защиту, которую имеет коронавирус, вирус гриппа. Благодаря этому концентрация перечисленных вирусов при полосканиях будет снижаться.
— Какие, на ваш взгляд, должны быть дальнейшие действия научного сообщества? Необходимо ли распространять данную информацию именно в медицинские учреждения? Потому что прямых указаний ВОЗ на этот счет нет. И как объяснить предполагаемую ценность данного ополаскивателя?
— Цетилпиридиния хлорид давно используется, это не новое вещество. Он также применялся и в ополаскивателях для полости рта. Однако текущую комбинацию в любом случае еще нужно проверять. Но я не вижу никакого вреда, а польза определенно есть, поэтому информацию стоит распространять.
Заключение
Результаты исследования, проведенного Unilever, показывают, что рецептура ополаскивателя для полости рта компании «Лесной Бальзам» компании Unilever, содержащая цетилпиридиния хлорид в концентрации 0,07%, подавляет активность суррогатного штамма вируса SARS-CoV-2 на 99,9%. Вирулицидная активность продемонстрирована в тестах in-vitro в течение рекомендуемого времени полоскания – 30 и 60 секунд.
Исследования длительности эффекта продолжаются однако по полученным в настоящий момент данным известно, что вирусная нагрузка (количество вирусных частиц, содержащихся в полости рта) снижается с помощью жидкостей для полоскания рта, содержащих CPC, в частности, ополаскивателя для полости рта «Лесной бальзам».
В настоящее время CPC в концентрации 0,07% содержат три наименования бренда (Ополаскиватели для полости рта с экстрактами коры дуба и пихты на отваре трав; с маслом кедровых орешков и экстрактом шалфея на отваре трав; с экстрактами прополиса и зверобоя на отваре трав). Однако, опираясь на данные исследования, Unilever принял решение увеличить содержание CPC во всех (кроме детского и двухфазных) ополаскивателях бренда «Лесной Бальзам» до указанной концентрации, что будет реализовано к концу 2020 года.
Штамм вируса SARS-COV-2, вызывающий COVID-19, распространяется воздушно-капельным путем, главным образом при кашле или чихании, что происходит до, во время и после острой фазы болезни, а также в бессимптомных случаях.2 Полученные данные позволяют предположить, что использование ополаскивателя для полости рта может стать полезным дополнением к повседневным мерам защиты от COVID-19, которые включают мытье рук, соблюдение социальной дистанции и ношение маски. Соблюдение мер по сокращению передачи вируса особенно важно в ситуации значительной доли бессимптомных носителей.
Компания продолжает проводить исследования на эту тему и недавно получены предварительные результаты нового исследования проведенного непосредственно на штамме вируса SARS-CoV-23. Эти исследования дополняют предыдущее исследование Unilever на суррогате вируса, опубликованное на платформе bioRxiv4, и являются логическим продолжением обширной дискуссии в международном медицинском сообществе и в СМИ вокруг использования ополаскивателей для полости рта в качестве дополнительной меры сокращения передачи вируса. Исследование Unilever является новейшим в большом цикле научных работ, оценивающих воздействие ополаскивателей на вирусную активность.
Ополаскиватель для полости рта прост в применении и легко может быть внедрен в повседневную гигиену в качестве дополнительной меры защиты как в симптоматических, так и в бессимптомных случаях. При этом ополаскиватель не гарантирует полную остановку передачи вируса от человека к человеку: продукт Unilever является косметическим средством и не применяется с целью лечения.
Примечания
- Исследование in-vitro, имитирующее вирусную нагрузку во рту
- Данные Всемирной организации здравоохранения: https://www.who.int/health-topics/coronavirus#tab=tab_1, Л.Л. Фернандес и др., Журнал стоматологических исследований, стр. 1–9 https://doi.org/10.1177%2F0022034520960070
- Результаты исследования находятся на стадии финального подтверждения
- https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.10.28.359257v1