Почки, вследствие определенных анатомо-функциональных особенностей, таких как высокая интенсивность кровотока, участие в элиминации из организма большого количества эндогенных метаболитов и продуктов биотрансформации ксенобиотиков, являются уязвимым органом, подвергающимся воздействию многочисленных химических агентов (тяжелые металлы, гликоли, пестициды, различные группы лекарственных препаратов). Высокая летальность данной нозологической формы нефропатологий, частая хронизация процесса, явная тенденция к росту обуславливают необходимость в поиске новых препаратов, предназначенных для лечения и профилактики заболеваний почек. Эффективными средствами являются многокомпонентные препараты, приготовленные на основе растительных объектов, обладающие системным поливалентным действием на организм.
Комбинированный препарат Урокам предназначен для профилактики и лечения хронических заболеваний мочевого пузыря и мочевыводящих путей, острых и хронических воспалительных и инфекционно-воспалительных заболеваний почек, для профилактики развития мочекаменной болезни.
Целью данной работы явилось изучение эффективности применения сиропа Урокам в условиях экспериментальной нефропатологии и его безопасности при длительном использовании («хроническая» токсичность).
Методы исследования
Опыты были проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180–280 г. Нефропротекторное действие препарата Урокам исследовали в сравнении с референтным средством Фитолизин на модели «сулемового» нефроза при лечебно-профилактическом введении исследуемых средств. Для создания модели нефропатологии животным подкожно вводили 0,1% водный раствор сулемы в дозе 4 мг/кг ежедневно в течение 5 дней [1]. Урокам в дозах 1,25 мл/кг и 2,5 мл/кг и Фитолизин в дозе 1,25 мл/кг начинали вводить перорально за 10 дней до введения сулемы, а затем совместно с сулемой. Через сутки после последнего введения ртути дихлорида крыс декапитировали под эфирным наркозом. Контрольная группа получала сахарный сироп (64% раствор сахарозы). Для оценки эффективности действия исследуемого препарата и эталонного средства измеряли осмолярность мочи, определяли содержание в сыворотке крови мочевины и креатинина, в моче — содержание креатинина [2], используя стандартные наборы «Ольвекс Диагностикум» и «ДДС».
Изучение общетоксического действия в условиях длительного применения проводили в соответствии с рекомендациями Фармакологического комитета [3]. Урокам вводили перорально 1 раз в сутки в течение 1 месяца в дозе 1,25 мл/кг (терапевтическая доза с учетом межвидового коэффициента пересчета доз) и 12,5 мл/кг (предположительно токсическая доза). В ходе эксперимента ежедневно наблюдали за общим состоянием животных, потреблением пищи и воды, состоянием волосяного покрова и слизистых оболочек, поведением. Еженедельно измеряли массу тела крыс. За 3 дня до окончания эксперимента исследовали состояние периферической и центральной нервной системы по изменению поведенческих реакций, характера двигательной активности, используя методику «открытого поля» [4].
Через 4 недели эксперимента у животных собирали мочу, затем декапитировали и проводили биохимические, гематологические и патолого-анатомические исследования. Мочу собирали утром, натощак в течение трех часов после 5% водной нагрузки. Визуально оценивали цвет, прозрачность, определяли относительную плотность и реакцию мочи (рН), а также содержание в моче белка, кетоновых тел, глюкозы, кровяных и желчных пигментов [5].
На основе гематологических и биохимических исследований оценивали белоксинтезирующую функцию печени (общий белок, альбумины, глобулины), нарушения функционального состояния печени (активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) и щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке крови, тимоловая проба (ТП), содержание билирубина, холестерина в сыворотке крови), сердца (активность аспартатаминотрансферазы (АсАТ) крови), функциональное состояние почек оценивали по содержанию мочевины в сыворотке крови, о состоянии углеводного обмена судили по содержанию глюкозы в крови [2].
Гематологические исследования периферической крови включали определение количества эритроцитов, ретикулоцитов, тромбоцитов и лейкоцитов крови, а также лейкоцитарной формулы, количества гемоглобина, гематокрита, СОЭ и осмотической резистентности эритроцитов [6].
Для оценки токсического действия препарата Урокам на внутренние органы определяли массу органов и проводили макро- и микроскопические исследования печени, почек, селезенки, сердца, желудка и легких.
Данные обрабатывали методом вариационной статистики с расчетом t-критерия Стьюдента.
Результаты и их обсуждение
Как видно из данных, представленных в табл. 1, введение сулемы животным вызывает токсическое поражение почек с выраженным синдромом ретенционной гиперазотемии. Так, у животных контрольной группы отмечали увеличение по сравнению с интактными значениями концентрации в крови креатинина в три раза, мочевины в пять раз и значения осмолярности мочи в четыре раза, а также уменьшение количества экскретируемого с мочой креатинина на 45%.
Полученные данные свидетельствуют, что эффективность нефропротекторного действия сиропа Урокам при его лечебно-профилактическом введении примерно одинакова при использовании в обеих дозах. Применение Урокама в дозе 1,25 мл/кг вызвало достоверное по сравнению с контролем снижение концентрации креатинина и мочевины в сыворотке крови на 79% и 52% соответственно, значения осмолярности мочи на 42% и увеличение количества выводимого с мочой креатинина на 68%. Использование Урокама в дозе 2,5 мл/кг также привело к снижению уровня креатинина в крови на 82%, мочевины на 66% и стимуляции экскреции креатинина с мочой на 87%. Отмечали положительную динамику в отношении изменения значения осмолярности мочи, но эти изменения достоверно не отличались от аналогичных значений у контрольной группы животных. У животных, получавших Фитолизин, достоверно изменилась только концентрация креатинина в сыворотке крови (-47%), а остальные показатели остались на уровне контрольных значений у нелеченных животных.
Таким образом, препарат Урокам оказывает выраженное нефрозащитное действие уже в дозе 1,25 мл/кг, превышающее таковое референтного средства, используемого в эквивалентной дозе. Использование исследуемого препарата в более высокой дозе не приводит к достоверному усилению эффективности.
При изучении общетоксического действия Урокама было установлено, что ежедневное введение сиропа Урокам в дозах 1,25 мл/кг и 12,5 мл/кг в течение 1-го месяца не вызвало гибели животных на всем протяжении эксперимента. Животные всех опытных групп не отличались от животных контрольной (получали 64% раствор сахарозы) и интактной групп по своему поведению, внешнему виду, потреблению пищи, состоянию волосяного и кожного покрова, окраске слизистых оболочек.
Изучение длительного применения сиропа Урокам на состояние центральной нервной системы по методу «открытого поля» показало, что данный препарат не оказывал влияния на поведенческую активность крыс.
Со стороны мочевыделительной системы у крыс обоего пола, получавших сироп Урокам в терапевтической и в токсической дозах, не установлено каких-либо отклонений в основных показателях мочи, а также наличия в ней патологических компонентов. Установлено увеличение объема собранной за три часа мочи у крыс обоего пола под влиянием Урокама (табл. 2). При этом мочегонное действие было более выраженным при использовании сиропа у самцов.
Изучение изменения биохимических показателей показало, что длительное введение сиропа Урокам привело к достоверному по сравнению с интактными животными снижению содержания глюкозы в крови (табл. 3) примерно в равной степени у самок и самцов.
Такие биохимические показатели, как содержание общего белка, альбуминов и глобулинов, соотношение альбуминовой и глобулиновой фракций, содержание холестерина, мочевины и общего билирубина в крови, характеризующих состояние белкового, липидного, пигментного обменов, антитоксическую функцию печени и состояние почек, при введении Урокама в обеих дозах достоверно не изменились по сравнению с контрольной и интактной группами. Было отмечено лишь незначительное повышение в крови активности АлАТ у самцов и самок при неизменной активности АсАТ и ЩФ и повышение уровня ТП у самок при длительном применении исследуемого препарата в дозе, превышающей терапевтическую в 10 раз (12,5 мл/кг) (табл. 4). Эти изменения были более выраженными при применении у самок, хотя были незначительными и не выходили за рамки физиологической нормы.
В клинической картине крови при длительном введении препарата в двух дозах отсутствовали достоверные изменения в содержании эритроцитов, ретикулоцитов, тромбоцитов, гемоглобина, в показаниях осмотической резистентности эритроцитов, гематокрита, СОЭ, а также в содержании лейкоцитов и в лейкоцитарной формуле, отражающей процентное соотношение различных видов лейкоцитов.
При макроскопической и патогистологической оценке состояния внутренних органов не выявлено каких-либо изменений во внешнем строении, в относительной массе и гистоморфологическом строении печени, почек, легких, сердца, селезенки и желудка у крыс обоего пола, получавших в течение месяца сироп Урокам.
Выводы
- Лечебно-профилактическое применение сиропа Урокам в условиях экспериментального токсического поражения почек сулемой оказывает нефропротекторное действие, эффективность которого по исследуемым биохимическим показателям крови и мочи выше эффективности препарата сравнения Фитолизина.
- Сироп Урокам обладает очень низкой токсичностью, у него практически отсутствуют побочные эффекты даже при длительном применении в дозе, значительно превосходящей терапевтическую.
Литература
- Сыров В. Н., Хушбактова З. А., Батиров Э. Х. и др. // Хим.-фармац. журн., 1993, № 3, 60–63.
- Колб В. Г., Камышников В. С. Справочник по клинической химии. Минск, 1982.
- Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под ред. Хабриева Р. У. Изд. второе, перераб. и доп. М.: Медицина, 2005.
- Крагина Л. А., Иноземцев А. Н., Тушманова Н. А. Биологические науки, 1992, № 6, 84–88.
- Строев Е. А., Макарова В. Г. Практикум по биологической химии: Учеб. пособие для фармац. вузов и фак. М.: Высшая школа, 1986.
- Юрковский О. И., Грицюк А. М. Общеклинические анализы в практике врача. М.: Медицина, 1997.
Е. Г. Доркина
ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», Пятигорск
Влияние длительного применения сиропа Урокам на диурез крыс-самок и крыс-самцов
Купить номер с этой статьей в pdf